Molao-motheo oa motheo oa DNA synthesis

Motsoako oa lik'hemik'hale oa DNA o thehiloe holim'a leano le tiileng-phase synthesis le chemistry ea phosphoramidite.Ho fapana le tlhaho ea DNA ea tlhaho, lisebelisoa tse ka har'a motsoako oa lik'hemik'hale tsa DNA ke DMT (4, 4-dimethoxytrityl) le phosphoramidite e fetotsoeng deoxyriboxyside, joalokaha ho bontšitsoe setšoantšong sa 1. The DNA synthesis e etsoa ka tšehetso e tiileng (re ka fana ka mefuta e fapaneng eaSehlopha sa Oligo Synthesis), ke hore CPG (khalase ea pore e laoloang) le PS (polystyrene), 'me motsoako oohle o etsoa kaDNA/RNA synthesizer, e leng thepa ea rona e ka sehloohong, e na le mohlala o fapaneng o kang: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 joalo-joalo, tataiso ea motsoako e tloha ho 3' ho ea ho 5', 'me nucleotide e hlahisoa ho tšehetso e tiileng ka e le' ngoe. potoloho ea motsoako.Potoloho e tloaelehileng e na le mehato e mene, Deprotection, Coupling, Capping le Oxidation (Setšoantšo sa 2).The Deprotection e behiloe ho tlosa sehlopha sa DMT holim'a tšehetso e tiileng kapa sehlopha sa 5' hydroxyl ho nucleoside e fetileng, 3% trichloroacetic acid e dichloromethane e sebelisoa e le setsi sa tšireletso.Joale phosphoramidite e fetotsoeng deoxyriboxyside e ile ea lumelloa ho pepesa sehlopha sa hydroxyl ka thuso ea activator, ke hore, 5-ethylthiotetrazole kapa 4, 5-dicyanoimidazole, ho etsa phosphitetriester (III), 'me ea hlokomela mohato oa Coupling.Mohato oa Capping o etsoa ho thibela sehlopha sa hydroxyl se sa sebetseng nakong ea ho kopanya, ho fokotsa sebopeho sa tatellano ea liphoso tse sa batleheng.Qetellong, phosphitetriester e sa tsitsang (III) e na le oxidized ho phosphortriester e tsitsitseng ea lik'hemik'hale (V) e nang le iodine e le oxidant hona joale ea pyridine.

DNA e entsoeng e ka 'na ea senyeha ho tloha tšehetsong e tiileng ka aminolysis, sehlopha se sirelelitsoeng sa 2-cyanoethyl ho phosphortriester le amide e holim'a nucleobase e phunyeletsoa ka nako e le' ngoe, Li-Synthesis Plates le Synthesis Columns ka li-racks li behoa ka ho toba ka kamoreng ea ho arabela. tsaThepa ea Tšireletso.Crude DNA e ka lokisoa ke HPLC, electrophoresis le OPC ha ho hlokahala, re ka boela ra u faLisebelisoa tsa ho hloekisabakeng sa Post-processing.